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- 品牌：Procedo中科普瑞昇
- 產(chǎn)地：中國(guó)
- 型號(hào)：詳詢
- 貨號(hào)：PRS-BCM-3D
- 價(jià)格： ￥10/毫升
- 發(fā)布日期： 2024-01-30
- 更新日期： 2024-08-12
| 產(chǎn)地 | 中國(guó) |
| 品牌 | Procedo中科普瑞昇 |
| 貨號(hào) | PRS-BCM-3D |
| 用途 | 科研 |
| 包裝規(guī)格 | 詳詢 |
| 是否進(jìn)口 | 否 |
Breast cancer類器官培養(yǎng)基是一款促進(jìn)Breast cancer類器官體外形成和擴(kuò)增的培養(yǎng)基。該產(chǎn)品為無(wú)菌的液體混合系統(tǒng)，含有維持目的細(xì)胞生長(zhǎng)所必需的氨基酸、維生素、有機(jī)和無(wú)機(jī)化合物以及生長(zhǎng)因子等。該培養(yǎng)基的獨(dú)特配方可以提供一個(gè)合適的細(xì)胞所需營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，促進(jìn)人Breast cancer類器官的體外生長(zhǎng)和擴(kuò)增。
4℃避光保存1個(gè)月內(nèi)有效。
1. Breast cancer類器官培養(yǎng)
（1）消化后的細(xì)胞懸液進(jìn)行計(jì)數(shù)。
（2）按每孔1~2×104個(gè)細(xì)胞密度計(jì)算所需細(xì)胞數(shù)，根據(jù)計(jì)算好的體積吸取細(xì)胞懸液加入預(yù)冷的1.5 mL離心管中，離心，棄上清，將細(xì)胞沉淀置于冰上。
（3）按1：2體積比，將一份體積的含1%BSA的DMEM加入2份體積的細(xì)胞外基質(zhì)膠（Corning#356231）中，輕輕混勻（全程冰上操作），然后在冰上將配好的基質(zhì)膠混合液與細(xì)胞沉淀充分混勻。
（4）將細(xì)胞沉淀與基質(zhì)膠的混合液按照35 μL/孔滴在已提前預(yù)熱好的24孔板中央，使之形成圓頂狀膠滴。緩慢將細(xì)胞培養(yǎng)板移至培養(yǎng)箱至少30 min。
（5）待基質(zhì)膠完全凝固，沿24孔壁緩慢加入1 mL/孔預(yù)先恢復(fù)至室溫的本類器官培養(yǎng)基，并將培養(yǎng)板置于37℃，5%CO2條件下靜置培養(yǎng)。
（6）鏡下觀察類器官形成情況，每3~4天更換一次培養(yǎng)基。
2. Breast cancer類器官的收集
（1）棄培養(yǎng)基，每孔加入1 mL預(yù)冷的無(wú)血清DMEM:F12培養(yǎng)基并用該培養(yǎng)基潤(rùn)洗槍頭，反復(fù)吹打至圓頂狀膠滴完全脫離板底，將孔內(nèi)吹散后的類器官混合液收集至15 mL離心管中。重復(fù)操作一次。將兩次洗脫下來(lái)的類器官混合液合并收集至同一離心管中，1500 rpm離心5 min，輕輕吸去上清和基質(zhì)膠層，沉淀待用。
（2）沉淀加入3-5 mL類器官解離試劑（PRS-ODR），37℃，200 rpm水平搖床上解離10 min（具體解離時(shí)間根據(jù)類器官大小和數(shù)量決定，以肉眼可見顆粒明顯減小一半為準(zhǔn)，可中途取解離的類器官顯微鏡下觀察，類器官解離至平均包含有5~10個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞團(tuán)塊大小 ）。
（3）解離結(jié)束后加入和解離試劑等體積的含10%FBS的DMEM稀釋。1500 rpm離心3 min，棄上清，待用。
3. Breast cancer類器官傳代
（1）收集好的細(xì)胞沉淀（以無(wú)肉眼可見基質(zhì)膠狀沉淀為準(zhǔn)）加入1~2 mL預(yù)冷的含1%BSA的DMEM培養(yǎng)基重懸，在4℃下，1500 rpm，離心5 min。
（2）小心吸棄上清，沉淀用Breast cancer類器官培養(yǎng)基重懸計(jì)數(shù)。
（3）按照步驟3（2）~（6）的操作，以大約1000個(gè)類器官/孔密度重新接種類器官，并繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)。
