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碧云天生產(chǎn)的Myco-Lumi™發(fā)光法支原體檢測(cè)試劑盒(高靈敏度儀器用) (Myco-Lumi™ Luminescent Mycoplasma Detection Kit for High Sensitivity Instrument)，簡(jiǎn)稱Myco-Lumi™或MycoLumi™，是一種通過化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)培養(yǎng)的細(xì)胞等生物材料中是否有支原體污染的試劑盒。

Myco-Lumi™發(fā)光法支原體檢測(cè)試劑盒(高靈敏度儀器用) (C0298)的用途與碧云天的同類產(chǎn)品Myco-Lumi™發(fā)光法支原體檢測(cè)試劑盒(低靈敏度儀器用) (C0297)相同，性能略有不同，具體請(qǐng)參考下表。兩種產(chǎn)品根據(jù)使用儀器的靈敏度對(duì)Myco-Lumi™發(fā)光法支原體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行了一定的改良，使檢測(cè)試劑盒更適合相應(yīng)的檢測(cè)儀器。在相同檢測(cè)儀器條件下，Myco-Lumi™發(fā)光法支原體檢測(cè)試劑盒(低靈敏度儀器用) (C0297)的讀值更高，一般為Myco-Lumi™發(fā)光法支原體檢測(cè)試劑盒(高靈敏度儀器用) (C0298)的10-50倍，所以Myco-Lumi™發(fā)光法支原體檢測(cè)試劑盒(低靈敏度儀器用) (C0297)更適合于低靈敏度、相對(duì)低讀值的化學(xué)發(fā)光儀，例如Molecular Devices的SpectraMax® M3等儀器，該類儀器的讀值較低，使用低靈敏度儀器專用的檢測(cè)試劑盒可確保檢測(cè)時(shí)可獲得良好的化學(xué)發(fā)光讀數(shù)。Myco-Lumi™發(fā)光法支原體檢測(cè)試劑盒(低靈敏度儀器用) (C0297)也可用于高靈敏度的儀器，此時(shí)讀值比較高，但對(duì)支原體的檢測(cè)靈敏度略差一些，即陽(yáng)性樣品的比值會(huì)低一些。而Myco-Lumi™發(fā)光法支原體檢測(cè)試劑盒(高靈敏度儀器用) (C0298)更適合于高靈敏度、相對(duì)高讀值的化學(xué)發(fā)光儀，例如ThermoFisher的多功能酶標(biāo)儀Varioskan Flash/Varioskan LUX等儀器，該類儀器的讀值較高，使用高靈敏度儀器專用的檢測(cè)試劑盒可使對(duì)于支原體的檢測(cè)靈敏度更高。Myco-Lumi™發(fā)光法支原體檢測(cè)試劑盒(高靈敏度儀器用) (C0298)與Lonza公司的MycoAlert™ Mycoplasma Detection Kit相似，而Myco-Lumi™發(fā)光法支原體檢測(cè)試劑盒(低靈敏度儀器用) (C0297)與Lonza公司的MycoAlert™ PLUS Mycoplasma Detection Kit相似。Myco-Lumi™發(fā)光法支原體檢測(cè)試劑盒(低靈敏度儀器用) (C0297)對(duì)支原體的檢測(cè)靈敏度略低于Myco-Lumi™發(fā)光法支原體檢測(cè)試劑盒(高靈敏度儀器用) (C0298)，具體表現(xiàn)為陽(yáng)性樣品的比值會(huì)低一些，但仍可滿足常規(guī)的檢測(cè)需求。兩種試劑盒的比較和選擇請(qǐng)參考下表：

支原體(Mycoplasma)是最小、 的原核生物。支原體有如下特征：支原體無(wú)細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，所以針對(duì)細(xì)胞壁的許多常見的抗生素，如青霉素或β-內(nèi)酰胺類抗生素對(duì)支原體無(wú)效；支原體大小介于細(xì)菌和病毒之間，約為0.2-0.8μm，所以部分支原體可通過0.22μm濾器，常規(guī)的過濾對(duì)支原體無(wú)效；很多支原體由于自身的生物合成能力有限而依靠宿主提供營(yíng)養(yǎng)，所以通常吸附或散落在細(xì)胞表面和細(xì)胞之間。支原體的這些特征使細(xì)胞培養(yǎng)過程中存在支原體污染的風(fēng)險(xiǎn)，細(xì)胞的支原體污染已經(jīng)成為一個(gè) 性的普遍問題。支原體污染可能會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞的狀態(tài)，使細(xì)胞的基因表達(dá)、代謝特征發(fā)生變化，導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)減緩、分化和死亡異常，嚴(yán)重影響細(xì)胞功能。這些影響因素會(huì)嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性、可重復(fù)性和一致性，因此支原體污染的檢測(cè)非常重要。

細(xì)胞培養(yǎng)過程中的細(xì)菌、酵母或霉菌污染在光學(xué)顯微鏡下可見，但支原體污染在光學(xué)顯微鏡下通常不可見，必須通過特定的檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)支原體污染的常用方法有支原體分離培養(yǎng)、ELISA、特殊的生化檢測(cè)、PCR檢測(cè)以及DNA熒光染色檢測(cè)等。上述檢測(cè)方法中，大多操作步驟相對(duì)比較煩瑣、靈敏性不高或所需時(shí)間較長(zhǎng)。

Myco-Lumi™發(fā)光法支原體檢測(cè)試劑盒是利用支原體特有酶的活性并通過ATP依賴的螢光素酶催化的發(fā)光反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)，通過比較檢測(cè)試劑加入前后ATP量的變化來(lái)確定樣品是否有支原體污染。整個(gè)檢測(cè)過程只有兩個(gè)步驟，僅需約15分鐘。 步是在樣品中加入支原體檢測(cè)試劑A，5分鐘后進(jìn)行檢測(cè)，讀值為A，此時(shí)檢測(cè)的是樣品中原有ATP的量； 步是加入支原體檢測(cè)試劑B，10分鐘后進(jìn)行檢測(cè)，讀值為B，此時(shí)如果樣品有支原體污染，其特有的酶可以將支原體檢測(cè)試劑B中的ADP轉(zhuǎn)換為ATP，此時(shí)檢測(cè)的就是原有的本底ATP量和由支原體特有酶催化新生成的ATP量的總和。通過計(jì)算讀值B與A的比值就可以判斷是否有支原體污染。如果比值大于1.2表示有支原體污染，比值越大說(shuō)明污染程度越高，如果比值小于0.9說(shuō)明沒有支原體污染，如果比值介于0.9和1.2之間，建議原細(xì)胞(包含原培養(yǎng)液)繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時(shí)之后再測(cè)試一次。本試劑盒檢測(cè)支原體的原理參考圖1。

圖1. Myco-Lumi™發(fā)光法支原體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)支原體的原理。細(xì)胞上清中如果含有支原體，加入支原體檢測(cè)試劑A后會(huì)裂解支原體，支原體中的內(nèi)容物釋放，釋放出的ATP以及細(xì)胞上清中的ATP會(huì)在螢光素酶催化下產(chǎn)生螢光信號(hào)；加入支原體檢測(cè)試劑B之后，支原體中特有的酶可以使ADP轉(zhuǎn)換成ATP，生成的ATP可以跟檢測(cè)試劑中的螢光素酶反應(yīng)，產(chǎn)生的螢光信號(hào)進(jìn)一步增加。

本試劑盒可快速、有效、高靈敏度地檢測(cè)支原體污染，在細(xì)胞培養(yǎng)過程中可隨時(shí)取少量培養(yǎng)液上清監(jiān)測(cè)是否有支原體污染。

本試劑盒螢光信號(hào)穩(wěn)定性好，在加入支原體檢測(cè)試劑A后，螢光信號(hào)穩(wěn)定，在5分鐘時(shí)即可檢測(cè)；加入支原體檢測(cè)試劑B后，如果是無(wú)支原體污染樣品，原有螢光信號(hào)會(huì)有一定程度的下降，而如果是有支原體污染樣品，螢光信號(hào)會(huì)隨時(shí)間延長(zhǎng)而增強(qiáng)，10分鐘時(shí)即可檢測(cè)。

如果發(fā)現(xiàn)有支原體污染，建議更換無(wú)污染的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。如果有必要預(yù)防或去除支原體，可以使用專用的支原體預(yù)防或去除試劑(C0288、C0290、C0292、C0293)。

本試劑盒包含一定量陽(yáng)性對(duì)照，檢測(cè)更可靠、便捷。陽(yáng)性對(duì)照不含支原體，無(wú)支原體污染風(fēng)險(xiǎn)。建議每次檢測(cè)都設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照也可單獨(dú)訂購(gòu)(C0299 Myco-Lumi™發(fā)光法支原體檢測(cè)陽(yáng)性對(duì)照)。